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iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）

iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）技术是一种多肽体外标记技术。该技术采用4-plex或8-plex同位素的标签，通过特异性标记多肽的氨基基团，进行LC-MS/MS分析，可同时比较多种不同样本中蛋白质的相对表达含量。​​​​​​​​​​​​​​
技术原理
应用领域
技术优势

  • 各种胁迫、生理、病理条件下细胞、组织样品中高通量蛋白表达谱分析
  • 各种物种的蛋白质组草图的构建

实验流程​​

  • iTRAQ 可于一次实验中同时标记 4 至 8 个的样品，操作简单快速，减少多次质谱检测中产生的系统误差。适用于对多个样品进行高通量的检测，实验设计更加灵活。
  • iTRAQ 是在肽段水平上进行的体外标记，几乎适用于所有类型的生物样本。
  • 重现性好、灵敏度高、定性与定量可同时进行。
  • 检测限低，可检测出低丰度蛋白。

iTRAQ试剂包括3个部分：报告基团（report group）、平衡基团（balance group）和肽反应基团（amine-specific reactive group）。报告基团相对分子质量为113-121Da(无120)，因此iTRAQ 试剂可同时标记8 组样品。平衡基团相对分子质量为192-184Da(无185)，使得八种iTRAQ试剂分子量均为305Da，保证标记的同一肽段m/z 相同。 肽反应基团将iTRAQ试剂与肽段上赖氨酸及N端氨基酸残基相连，在其上报告基团通过平衡基团与反应基团相连，形成等量异位标签。