SCIEX液相色谱串联质谱系统测定微量血中的脂溶性维生素

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来源:SCIEX中国公司 | 作者:SCIEX中国公司 | 发布时间: 2019-05-30 | 2717 次浏览 | 分享到:

维生素是维持身体健康所必需的一类有机化合物。这类物质在体内既不能是构成身体组织的原料，也不是能量的来源，而是一类调节物质，在物质代谢中起重要作用。

引言
        脂溶性维生素(Liposoluble Vitamins) 包括维生素A、维生素D、维生素E、维生素K，不溶于水而溶于脂肪及有机溶剂，由长的碳氢链或稠环组成的聚戊二烯化合物。维生素是维持身体健康所必需的一类有机化合物。这类物质在体内既不能是构成身体组织的原料，也不是能量的来源，而是一类调节物质，在物质代谢中起重要作用。维生素A：维持正常视觉，维持上皮细胞、组织完整，增强机体免疫力，参与铁代谢；维生素E：抗氧化、清除自由基，保护神经功能，增强机体免疫力，维持正常生育功能；维生素D：维持骨骼发育，调节抗原提呈细胞的分化、淋巴细胞的增值，影响免疫力、智力发育；维生素K：参与凝血因子的合成，参与骨钙素的合成。
        本方法首先采用液液萃取方法对生物样本进行前处理，然后SCIEX液相色谱串联质谱系统系统，以待测目标物的同位素标记物为内标，检测人血清中维生素A (VA)、25-羟基维生素 D2（25OHVD2）、25-羟基维生素D3（25OHVD3）、维生素E （VE）、维生素K1 (VK1)。

实验部分
        样品处理：向1.5 mL EP管中，依次加入10 μL内标工作液(表 2)、50 μL全血和140 μL甲醇；涡旋20秒，混匀；再加入0.6 mL正己烷，3,000 r/min涡旋100 s，然后10,000 rpm离心3分钟；取离心后的上清液，在氮气下吹干。残渣用100 μL 80%甲醇复溶、离心， LC-MS/MS进样20 μL分析。

色谱条件：
        色谱柱使用Phenomenex kinetex C18 column (50×3.0 mm, 2.6 μm）进行分离，流动相选用水（含0.1% 甲酸）作为A相，和甲醇（含0.1% 甲酸）作为B相，柱温设为40 ℃，进样量为20 μL；进行梯度洗脱，液相梯度见表2。

质谱条件：
使用SCIEX TripleQuad™ 4500MD质谱系统。采用Heated Nebulizer（APCI）和多反应监测（Multiple Reaction Monitoring， MRM）模式进行质谱扫描。离子源参数：加热气（GS1）为 60 psi，脱溶剂气温度为550 ℃；气帘气（Curtain Gas，CUR）为35 psi，碰撞气（Collision Gas，CAD）为6 psi；雾化器电流（Nebulizer Current, NC)：5 μA。为了获取较好的稳定性和灵敏度，各化合物监测离子对的去簇电压（Declustering Potential， DP）和碰撞电压（Collision Energy，CE），目标物定量离子对、定性离子对以及内标物监测离子对等参数均经过系统优化，离子对信息见表3。

结果与讨论
图1 VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和VK1在定量下限LOQ提取离子流图。图2是人全血中VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和 VK1的提取离子流色谱图，峰型对称，响应良好。
VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和VK1回归方程和线性范围见表3，VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和VK1在相应的浓度范围内线性良好，r均大于0.996。